Een van die belangrikste voordele van selkultuur is die vermoë om die fisiese chemie van selreproduksie (dws temperatuur, pH, osmotiese druk, O2- en CO2-spanning) en fisiologiese omgewing (dws hormoon- en voedingstofkonsentrasie) te manipuleer.Benewens temperatuur word die kultuuromgewing deur die groeimedium beheer.
Alhoewel die fisiologiese omgewing van kultuur nie so duidelik soos sy fisiese en chemiese omgewing is nie, 'n beter begrip van serumkomponente, identifikasie van groeifaktore wat nodig is vir proliferasie, en 'n beter begrip van die mikro-omgewing van selle in kultuur.(Dws sel-sel-interaksie, gasdiffusie, interaksie met die matriks) laat nou toe dat sekere sellyne in serumvrye media gekweek word.
1. Kultuuromgewing beïnvloed selgroei
Neem asseblief kennis dat die selkultuurtoestande vir elke seltipe verskil.
Die gevolge van afwyking van die kultuurtoestande wat vir 'n bepaalde seltipe vereis word, wissel van die uitdrukking van abnormale fenotipes tot die volledige mislukking van selkultuur.Daarom beveel ons aan dat jy vertroud raak met die sellyn waarin jy belangstel en die instruksies wat verskaf word vir elke produk wat jy in jou eksperiment gebruik, streng volg.
2. Voorsorgmaatreëls vir die skep van 'n geoptimaliseerde selkultuuromgewing vir jou selle:
Kultuurmedia en serum (sien hieronder vir meer inligting)
pH- en CO2-vlakke (sien hieronder vir meer inligting)
Kweek plastiek (sien hieronder vir meer inligting)
Temperatuur (sien hieronder vir meer inligting)
2.1 Kulturele media en serum
Die kultuurmedium is die belangrikste deel van die kultuuromgewing, want dit verskaf die voedingstowwe, groeifaktore en hormone wat nodig is vir selgroei, en reguleer die pH en osmotiese druk van die kultuur.
Alhoewel die aanvanklike selkultuureksperimente uitgevoer is met behulp van natuurlike media verkry uit weefselekstrakte en liggaamsvloeistowwe, het die behoefte aan standaardisering, mediakwaliteit en verhoogde aanvraag gelei tot die ontwikkeling van definitiewe media.Die drie basiese tipes media is basale media, verminderde serummedia en serumvrye media, en hulle het verskillende vereistes vir serumaanvulling.
2.1.1 Basiese medium
Gibco-selkultuurmedium
Die meeste sellyne groei goed in basiese media wat aminosure, vitamiene, anorganiese soute en koolstofbronne (soos glukose) bevat, maar hierdie basiese mediaformulerings moet met serum aangevul word.
2.1.2 Verminderde serummedium
Bottel met Gibco Low Serum Medium
Nog 'n strategie om die nadelige effekte van serum in selkultuur eksperimente te verminder, is om serum-verminderde media te gebruik.Verminderde serummedium is 'n basiese mediumformule ryk aan voedingstowwe en faktore wat van diere afkomstig is, wat die hoeveelheid serum wat benodig word, kan verminder.
2.1.3 Serumvrye medium
Bottel met Gibco serumvrye medium
Serumvrye medium (SFM) omseil die gebruik van diereserum deur serum te vervang met toepaslike voeding- en hormoonformulerings.Baie primêre kulture en sellyne het serumvrye mediumformulerings, insluitend die Chinese hamster-ovarium (CHO) rekombinante proteïenproduksielyn, verskeie hibridoomsellyne, inseklyne Sf9 en Sf21 (Spodoptera frugiperda), sowel as vir Die gasheer vir virusproduksie (byvoorbeeld, 293, VERO, MDCK, MDBK), ens. Een van die belangrikste voordele van die gebruik van 'n serumvrye medium is die vermoë om die medium selektief vir spesifieke seltipes te maak deur 'n gepaste kombinasie van groeifaktore te kies.Die volgende tabel lys die voordele en nadele van serumvrye media.
Voordeel
Verhoog duidelikheid
Meer konsekwente prestasie
Makliker suiwering en stroomaf verwerking
Evalueer selfunksie akkuraat
Verhoog produktiwiteit
Beter beheer van fisiologiese reaksies
Verbeterde selmedia-opsporing
Nadeel
Seltipe spesifieke medium formule vereistes
Benodig hoër reagenssuiwerheid
Vertraging in groei
2.2.1 pH-vlak
Die meeste normale soogdiersellyne groei goed by pH 7.4, en die verskille tussen verskillende sellyne is klein.Daar is egter getoon dat sommige getransformeerde sellyne beter groei in 'n effens suur omgewing (pH 7.0 – 7.4), terwyl sommige normale fibroblastsellyne 'n effens alkaliese omgewing verkies (pH 7.4 – 7.7).Inseksellyne soos Sf9 en Sf21 groei die beste by pH 6,2.
2.2.2 CO2-vlak
Die groeimedium beheer die pH van die kultuur en buffer die selle in die kultuur om veranderinge in pH te weerstaan.Gewoonlik word hierdie buffering verkry deur organiese (byvoorbeeld HEPES) of CO2-bikarbonaat-gebaseerde buffers te bevat.Omdat die pH van die medium afhang van die delikate balans van opgeloste koolstofdioksied (CO2) en bikarbonaat (HCO3-), sal veranderinge in atmosferiese CO2 die pH van die medium verander.Daarom, wanneer 'n medium gebruik word wat gebuffer is met 'n CO2-bikarbonaat-gebaseerde buffer, is dit nodig om eksogene CO2 te gebruik, veral wanneer selle in oop kultuurskottels gekweek word of getransformeerde sellyne teen hoë konsentrasies gekweek word.Alhoewel die meeste navorsers gewoonlik 5-7% CO2 in die lug gebruik, gebruik die meeste selkultuureksperimente gewoonlik 4-10% CO2.Elke medium het egter 'n aanbevole CO2-spanning en bikarbonaatkonsentrasie om die korrekte pH en osmotiese druk te bereik;vir meer inligting, verwys asseblief na die medium vervaardiger se instruksies.
2.3 Kweek van plastiek
Selkultuurplastiek is beskikbaar in 'n verskeidenheid vorms, groottes en oppervlaktes om by verskeie selkultuurtoepassings te pas.Gebruik die selkultuur plastiek oppervlakgids en selkultuurhouergids hieronder om jou te help om die regte plastiek vir jou selkultuurtoepassing te kies.
Bekyk alle Thermo Scientific Nunc-selkultuurplastiek (advertensieskakel)
2.4 Temperatuur
Die optimale temperatuur vir selkultuur hang in 'n groot mate af van die liggaamstemperatuur van die gasheer waaruit die selle geïsoleer is, en in 'n mindere mate van die anatomiese veranderinge in temperatuur (byvoorbeeld, veltemperatuur kan laer wees as dié van skeletspiere ).Vir selkultuur is oorverhitting 'n ernstiger probleem as oorverhitting.Daarom word die temperatuur in die broeikas gewoonlik effens onder die optimum temperatuur gestel.
2.4.1 Optimum temperatuur vir verskeie sellyne
Die meeste menslike en soogdiersellyne word by 36°C tot 37°C gehou vir optimale groei.
Insekselle word by 27°C gekweek vir optimale groei;hulle groei stadiger by laer temperature en temperature tussen 27°C en 30°C.Bo 30°C neem die lewenskragtigheid van insekselle af, al keer dit terug na 27°C, sal die selle nie herstel nie.
Voëlsellyne benodig 38,5°C om maksimum groei te bereik.Alhoewel hierdie selle by 37°C gehou kan word, sal hulle stadiger groei.
Sellyne afkomstig van koelbloedige diere (soos amfibieë, kouewatervisse) kan 'n wye temperatuurreeks van 15°C tot 26°C verdra.
Postyd: Feb-01-2023