Besoedeling van selkulture kan maklik die mees algemene probleem in selkultuurlaboratoriums word, wat soms baie ernstige gevolge veroorsaak.Selkultuurkontaminante kan in twee kategorieë verdeel word, chemiese kontaminante soos medium-, serum- en wateronsuiwerhede, endotoksiene, weekmakers en skoonmaakmiddels, en biologiese kontaminante soos bakterieë, skimmels, giste, virusse, mikoplasmas-kruisinfeksie.Besoedel deur ander sellyne.Alhoewel dit onmoontlik is om kontaminasie heeltemal uit te skakel, kan die frekwensie en erns daarvan verminder word deur die bron deeglik te verstaan en goeie aseptiese tegnieke te volg
1. Hierdie afdeling gee 'n uiteensetting van die hooftipes biologiese kontaminasie:
Bakteriese kontaminasie
Mould en virus besmetting
Mycoplasma besmetting
Gis kontaminasie
1.1 Bakteriese kontaminasie
Bakterieë is 'n groot groep alomteenwoordige eensellige mikroörganismes.Hulle is gewoonlik net 'n paar mikron in deursnee en kan in 'n verskeidenheid vorms kom, van sfere tot stawe en spirale.Vanweë hul alomteenwoordigheid, grootte en vinnige groeitempo, is bakterieë, saam met giste en skimmels, die mees algemene biologiese kontaminante in selkultuur.
1.1.1 Opsporing van bakteriese kontaminasie
Bakteriese kontaminasie word maklik opgespoor deur visuele inspeksie van die kultuur binne 'n paar dae nadat dit besmet geraak het;
Besmette kulture lyk gewoonlik troebel (dws troebel), soms met 'n dun film op die oppervlak.
Skielike dalings in die pH van die kweekmedium kom ook gereeld voor.
Onder 'n laekragmikroskoop verskyn die bakterieë as klein, bewegende korrels tussen die selle, en waarneming onder 'n hoëkragmikroskoop kan die vorms van individuele bakterieë oplos.
1.2 Vorm- en virusbesmetting
1.2.1 Mouldbesmetting
Skimmels is eukariotiese mikroörganismes van die swamkoninkryk wat groei in die vorm van meersellige filamente wat hifes genoem word.Die verbindingsnetwerke van hierdie meersellige filamente bevat geneties identiese kerne wat kolonies of miselium genoem word.
Soortgelyk aan giskontaminasie, bly die pH van die kultuur stabiel gedurende die aanvanklike fase van kontaminasie en neem dan vinnig toe namate die kultuur erger besmet raak en troebel word.Onder die mikroskoop is miselium gewoonlik filamentagtig, soms as digte trosse spore.Die spore van baie skimmels kan in uiters harde en onherbergsame omgewings oorleef tydens hul dormante fase en word slegs geaktiveer wanneer die regte groeitoestande teëgekom word.
1.2.2 Virusbesmetting
Virusse is mikroskopiese aansteeklike middels wat die gasheersel se masjinerie vir voortplanting oorneem.Hul uiters klein grootte maak hulle moeilik om in kultuur op te spoor en om te verwyder uit reagense wat in selkultuurlaboratoriums gebruik word.Aangesien die meeste virusse baie streng vereistes vir hul gashere het, beïnvloed dit gewoonlik nie selkulture van ander spesies as die gasheer nie.
Die gebruik van virus-geïnfekteerde selkulture kan egter 'n ernstige risiko vir die gesondheid van laboratoriumpersoneel inhou, veral as menslike of primaatselle in die laboratorium gekweek word.
Virale infeksie in selkulture kan opgespoor word deur elektronmikroskopie, immunokleuring met 'n stel teenliggaampies, ELISA of PCR met toepaslike virale primers.
1.3 Mikoplasma-besmetting
Mikoplasmas is eenvoudige bakterieë sonder selwande, en daar word gedink dat hulle die kleinste self-repliserende organismes is.As gevolg van hul uiters klein grootte (gewoonlik minder as 1 mikron), is mikoplasma moeilik om op te spoor totdat dit uiters hoë digthede bereik en selkulture laat agteruitgaan;Tot dan is daar gewoonlik geen duidelike teken van infeksie nie.
1.3.1 Opsporing van mikoplasma-kontaminasie
Sommige stadiggroeiende mikoplasmas kan in kulture voortduur sonder om seldood te veroorsaak, maar dit verander die gedrag en metabolisme van gasheerselle in kulture.
Chroniese mikoplasma-infeksie kan gekenmerk word deur verminderde selproliferasietempo, verlaagde versadigingsdigtheid en agglutinasie in suspensiekultuur.
Die enigste betroubare manier om mykoplasma-kontaminasie op te spoor is egter om die kultuur gereeld te toets deur fluoresserende kleuring (bv. Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunokleuring, outoradiografie of mikrobiese toetsing te gebruik.
1.4 Gis kontaminasie
Giste is eensellige eukariote van die swamkoninkryk, wat in grootte wissel van 'n paar mikron (gewoonlik) tot 40 mikron (selde).
1.4.1Opsporing van gisbesoedeling
Soos met bakteriële kontaminasie, kan kulture wat met gis besmet is, troebel word, veral as die kontaminasie in 'n gevorderde stadium is.Die pH van kulture wat met gis gekontamineer is, verander baie min totdat die kontaminasie ernstiger word, op watter stadium die pH gewoonlik toeneem.Onder die mikroskoop verskyn gis as individuele eiervormige of sferiese deeltjies en kan kleiner deeltjies produseer.
2.Kruisinfeksie
Alhoewel dit nie so algemeen soos mikrobiese kontaminasie is nie, is uitgebreide kruiskontaminasie van baie sellyne met HeLa en ander vinnig groeiende sellyne 'n duidelik gedefinieerde probleem met ernstige gevolge.Kry sellyne van betroubare selbanke, kontroleer gereeld die eienskappe van die sellyne en gebruik goeie aseptiese tegnieke.Hierdie praktyke sal jou help om kruisbesmetting te vermy.DNS-vingerafdrukke, kariotipering en isotipering kan bevestig of daar kruisbesmetting in jou selkultuur is.
Alhoewel dit nie so algemeen soos mikrobiese kontaminasie is nie, is uitgebreide kruiskontaminasie van baie sellyne met HeLa en ander vinnig groeiende sellyne 'n duidelik gedefinieerde probleem met ernstige gevolge.Kry sellyne van betroubare selbanke, kontroleer gereeld die eienskappe van die sellyne en gebruik goeie aseptiese tegnieke.Hierdie praktyke sal jou help om kruisbesmetting te vermy.DNS-vingerafdrukke, kariotipering en isotipering kan bevestig of daar kruisbesmetting in jou selkultuur is.
Postyd: Feb-01-2023